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Nature Methods:新方法擴增PCR技術目標DNA
新聞來源:生物谷 時間:2014-08-05

聚合酶鏈反應又稱PCR技術,是20世紀80年代中期發展出來的體外核酸擴增技術,其原理類似于DNA的體內復制,只是在試管中給DNA的體外合成提供一種合適的條件,能在一個試管內將一種目標基因或某一DNA片段于數小時內擴增至十萬乃至百萬倍,使肉眼能直接觀察和判斷。PCR技術被認為是生物醫學領域中的一項革命性創舉和里程碑。

   研究人員在9月在線出版的《自然—方法學》期刊上報告,他們發展出一種策略能夠在一次反應中擴增多個目標DNA。

   PCR技術的實施需要獲得位于目標DNA序列兩端的兩個引物。因為這些引物序列位對特定的目標區域而言是唯一的,所以,從理論上講,多種不同目標的引物能夠同時用于相同的PCR反應中,這種反應又稱多元反應。但在實際運作中,多引物會導致意想不到的底物和引物二聚體的形成,這些由外界因素或作用所產生的矯作物嚴重影響了擴增的效率。

   為將這些矯作物的影響降到最小程度,Anthony  Brookes和同事研制了一種固相擴增法,即通過將每種引物固定在一種固體表面而將它們彼此分開。他們的實驗表明,這種名為MegaPlex-PCR的技術能隨機選擇性地擴增75個基因組區域,擴增質量也很好。(科學時報)

原始出處:

Nature Methods - 4, 835 - 837 (2007)
Published online: 16 September 2007; | doi:10.1038/nmeth1091

MegaPlex PCR: a strategy for multiplex amplification

1 Linda Str?mqvist Meuzelaar1, Owen Lancaster1, J Paul Pasche2, Guido Kopal2 & Anthony J Brookes1

 Department of Genetics, University of Leicester, University Road, Leicester, LE1 7RH, UK.

2  Roche Applied Science, Nonnenwald 2, 82372 Penzberg, Germany.

Correspondence should be addressed to Anthony J Brookes ajb97@leicester.ac.uk

'MegaPlex PCR' is a robust technology for highly multiplexed amplification of specific DNA sequences. It uses target-specific pairs of PCR primers that are physically separated by surface immobilization. Initial surface-based amplification cycles are then coupled to efficient solution-phase PCR using one common primer pair. We demonstrate this method by co-amplifying and genotyping 75 unselected human single-nucleotide polymorphism (SNP) loci.


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